什么是FISH检测？
原位杂交技术(ISH)的检测方法包括荧光原位杂交（FISH）、银增强原位杂交（SISH）和显色原位杂交（CISH），FISH技术是根据碱基互补配对原则，通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交，在荧光显微镜下观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的探针信号，以获得细胞核内染色体（或染色体片段）上基因状态的信息，主要用于检测染色体数目异常、结构改变及特定基因的扩增/缺失，是检测染色体扩增和重排的金标准。目前，FISH检测人表皮生长因子受体2（HER2）基因扩增临床应用较为广泛，且有大量指南及研究支持。HER2扩增的检测方法包括免疫组织化学（IHC）、FISH，以及经过HER2 IHC或FISH验证并与之等效的二代测序试剂盒。
下面以HER2基因扩增为例说明为什么要做FISH检测？
《乳腺癌HER2检测指南（2024版）》中提出，所有乳腺原发浸润性癌、新辅助治疗后残余肿瘤、复发病灶、转移病灶建议尽可能获取肿瘤组织进行HER2检测，采用IHC检测HER2蛋白的表达水平，原位杂交法检测 HER2基因扩增水平。IHC检测方法简单、快速，可作为HER2检测的常规手段，研究结果显示，在免疫组化0、1+、和3+时分别存在一定数量的假阴性和假阳性，特别是免疫组化2+的乳腺癌仍然存在30%的患者HER2基因扩增，而此类人群亦能受益于赫赛汀，因此为保证检测结果的准确性，对免疫组化HER2 IHC2+浸润性乳腺癌患者进行FISH检测来准确判断HER2扩增状态，以避免免疫组化假阴性导致患者丧失抗HER2治疗的最佳时机，并避免免疫组化假阳性给患者带来的潜在化疗风险。目前IHC和FISH对HER2较低水平表达的精准检测较为困难，但是在缺乏临床验证和/或实用性的情况下，临床实践中尚无针对HER2较低水平表达的可替代检测技术。
《结直肠癌分子病理检测临床实践指南（2025版）》中建议对经标准治疗后进展的转移性结直肠癌患者行HER2扩增检测，以判断是否适合接受相应的靶向治疗或免疫治疗。
HER2也是胃癌治疗的重要靶点，《中国抗癌协会（CACA）胃癌整合诊治指南》、《中国临床肿瘤学会（CSCO）胃癌诊疗指南》、《胃癌HER2检测指南》等均推荐所有经病理诊断证实为胃腺癌的病例均有必要进行HER2检测，这对于筛选潜在抗HER2治疗获益人群具有重要的临床意义。大型国际多中心HER-EAGLE研究显示，胃癌全球HER2阳性IHC3+或IHC2+且原位杂交阳性率约为10%～20%。中国胃癌HER2阳性率约为12%～13%。
FISH检测常采用什么样本？
常规HER2检测推荐标本类型为：手术切除标本；微创旋切标本；粗针穿刺活检标本；大于100个癌细胞的细胞学标本/蜡块。由于HER2表达存在时空异质性，肿瘤组织的取样可能造成检测结果可能无法反映肿瘤全貌，因此当多灶性/多中心性浸润性乳腺癌的多个癌灶存在不同组织学类型和/或分级时，建议应尽可能对每个癌灶进行HER2检测。DESTINY⁃Breast04及DESTINY⁃Breast06临床研究结果证实无论是原发灶还是转移灶，当标本检测出HER2低/超低表达时使用T⁃DXd均能取得一定的疗效。因此为保证HER2低/超低表达的患者有接受治疗的机会，建议在实践工作中对复发病灶、转移病灶尽可能获取肿瘤组织进行HER2检测。
所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定（1 h内），对于骨转移标本，区分肿瘤的质硬/软区域进行分别处理，分离组织分别按常规流程处理，其中质硬骨组织标本建议使用EDTA脱钙液，以减轻脱钙液对转移标本HER2检测的影响。
在实际工作中，白片制作后要及时使用，研究显示，白片保存时间会影响HER2状态的诊断，随着白片存放时间变长，HER2的表达逐渐减弱,因此为防止抗原丢失，建议未染色切片置于室温不宜超过6周。HER2低水平表达病例对应白片中的 HER2抗原不稳定性增加，低温、低湿环境保存对其低水平表达检测结果的影响相对较小。因此，标本的存放也很重要。
病理科 杨勇娅
